Direkte Quantifizierung von Proteinen aus Spektrophotometern (UV-Methode)
Mit dieser Methode wird das Protein direkt bei einer Wellenlänge von 280 nm getestet. Wählen Sie die Warburg-Formel, das Photometer kann direkt die Probenkonzentration anzeigen oder wählen Sie die geeignete Umwandlungsmethode, um den Absorptionswert in die Probenkonzentration zu konvertieren. Der Proteinbestimmungsprozess ist sehr einfach. Testen Sie zuerst das Leerzeichen und testen Sie dann das Protein direkt. Aufgrund des Vorhandenseins einiger Verunreinigungen in dem Puffer wird die "Hintergrund" -Information bei 320 nm im Allgemeinen eliminiert und diese Funktion wird auf "EIN" gesetzt. Ähnlich wie bei der Testnucleinsäure muss der Extinktionswert von A280 mindestens größer als 0,1 A sein, und der optimale lineare Bereich liegt zwischen 1,0-1,5. Wenn die Warburg-Formel verwendet wurde, um die Probenkonzentration in dem Experiment zu zeigen, wurde gefunden, dass der Messwert "driftet". Dies ist ein normales Phänomen. Solange die Beobachtung des Absorptionswertes von A280 1% nicht übersteigt, ist das Ergebnis sehr stabil. Der Grund für die Drift ist, dass der Extinktionswert der Warburg'schen Formel in Konzentration umgerechnet und mit einem bestimmten Faktor multipliziert wird. Solange sich der Absorptionswert geringfügig ändert, wird die Konzentration verstärkt und das Ergebnis ist sehr instabil. Protein-Direkt-Quantifizierungsmethoden sind geeignet, um relativ reine, relativ einkomponentige Proteine zu testen. Die direkte UV-Quantifizierung ist schneller und einfacher durchzuführen als die Kolorimetrie; es ist jedoch anfällig für Störungen durch parallele Substanzen wie DNA-Interferenz und geringe Empfindlichkeit erfordert hohe Proteinkonzentrationen.
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